GST亲和层析介质简介
GST亲和层析介质简介
GST亲和层析介质是专门设计用于分离纯化谷胱甘肽S-转移酶（GST）标签蛋白、其它来源谷胱甘肽S-转移酶以及和谷胱甘肽具有亲和作用的蛋白的亲和层析介质。GST亲和层析具有操作条件温和、特异性强的特点，有利于蛋白的活性保持和高纯度目标蛋白的快速制备，通常一步亲和层析即可得到高纯度的目标蛋白。
GST QZT 4FF亲和层析介质以高交联的琼脂糖凝胶为基质，以谷胱甘肽为配基，通过间隔臂长短和配基密度的合理调控，产品具有载量高（>20mg GST融合蛋白/ml介质）、特异性强、物理和化学稳定性良好、使用寿命长、易于放大等特点，是研发和生产的理想选择。
GST亲和介质主要性能参数
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参数 |
技术指标 |
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基质 |
4%交联琼脂糖凝胶 |
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配基 |
谷胱甘肽 |
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平均粒径 |
90 μm |
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配基密度 |
3-6 mgGSH/mL |
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动态载量 |
≥20 mg GST融合蛋白/mL |
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推荐流速 |
150 cm/h |
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最高耐压（净压）* |
≥0.1MPa (1 bar) |
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pH稳定性 |
3-12 |
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化学稳定性 |
在常用的水溶性缓冲液中均稳定，在70%乙醇、30%异丙醇、6 M盐酸胍、1 M乙酸（pH4）中均稳定 |
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储存条件 |
4-8℃（20%乙醇） |
*：介质装填高度 10 cm，温度25°C，溶液为H2O 的条件下测定，耐压为扣除系统压力后的净压力。
1. 分离纯化应用实例
样品：GST融合蛋白
层析介质：GST QZT 4FF介质（2.55 cm ×1.0 cm I.D., CV=2.0 mL）；
对照介质：A（2.55 cm ×1.0 cm I.D., CV=2.0 ml, 国际知名品牌）；
Buffer A: 50 mM Tris-HCl+0.15 M NaCl， pH8.0；
Buffer B: 50 mM Tris-HCl+10 mM GSH；
上样量：10 mL；
流速：0.5 mL/min。
图1 GST层析谱图（A：对照介质；B：森辉介质）
GST标签蛋白经过一步亲和层析，即可得到电泳纯目标蛋白。与对照介质相比，森辉介质具有更高的载量，洗脱峰更高，洗脱的目标蛋白更多。
2. 介质载量对比
以GST标签蛋白为模型蛋白上样，进行GST亲和介质载量评价，并与国内外主流产品（对照介质A、B、C）进行对比样品，结果如图1所示，结果表明森辉介质具有更高的载量，高于市场同类产品100% 以上。
3. 介质稳定性对比
在GST亲和介质使用过程中，需要定期对介质进行CIP处理。分别对几种常用的清洗溶剂（0.1和0.5M氢氧化钠、6M盐酸胍、70%乙醇）进行考察，研究其对介质稳定性的影响。
3.1、0.5M氢氧化钠对介质稳定性的影响
GST亲和介质对高浓度氢氧化钠不耐受，不建议频繁采用0.5M氢氧化钠清洗；与对照介质A相比，森辉介质对0.5M氢氧化钠更耐受。
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介质 |
氢氧化钠溶液浓度 |
浸泡时间 |
载量下降幅度 |
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对照介质A |
0.5M |
24h |
-56.1% |
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GST QZT 4FF |
0.5M |
24h |
-39.2% |
3.2、0.1M氢氧化钠对介质稳定性的影响
将GST QZT 4FF和某进口对照介质A储存在0.1 M NaOH溶液中，室温下储存15天。结果表明GST 亲和介质对0.1M NaOH具有一定耐受性，可根据需要选用低浓度碱溶液清洗。与对照介质A相比，GST QZT 4FF具有更好的碱耐受性。
图1 0.1M氢氧化钠溶液中洗脱载量变化对比
3.3、6M盐酸胍对介质稳定性的影响
将GST QZT 4FF和某进口对照介质A储存在6M盐酸胍溶液中，室温下储存15天。结果表明GST 亲和介质对6M盐酸胍耐受性良好，载量无明显变化。
图2 6M盐酸胍溶液中洗脱载量变化对比
3.4、70%乙醇对介质稳定性的影响
将GST QZT 4FF和某进口对照介质A储存在70%乙醇溶液中，室温下储存15天。15天内，GST QZT 4FF的动态载量基本上没有发生变化，进口对照介质A在第10天时，载量下降至原始载量的80%，15天内载量下降至原始载量的50%。
图3 70%乙醇溶液中洗脱载量变化对比
中科森辉GST QZT 4FF亲和介质产品具有更高的载量，以及更好的化学稳定性，对于所考察清洗溶剂（NaOH、盐酸胍、乙醇）的耐受性优于进口同类产品。
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