Protein A亲和介质

1. 产品简介

Protein A能特异性地与抗体的Fc区结合,所以Protein A亲和介质可用于抗体(单抗和多抗)的分离纯化,经过一步亲和层析,即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体。Protein A QZT 4FF亲和介质以高流速琼脂糖凝胶为基质,以重组Protein A为配基,具有优异的物理化学稳定性,配基不易脱落,寿命长,使用方便,应用广泛。

2. 产品特性

Protein A QZT 4FF亲和介质的理化性质和产品特性如表1所示。

表1 Protein A QZT 4FF亲和介质的理化性质和产品特性

参数

指标

基质

4%交联琼脂糖凝胶

配基

r-Protein A

形状

球形

介质平均粒径

90 μm (45-165)

配基密度

6 mg Protein A/ml wet gel

动态载量

45-50 mg h-IgG/ml wet gel

最高流速(25℃)

450 cm/h

推荐流速

<150 cm/h

最高耐压

0.3 MPa (3 bar)

pH稳定性

3-10(长时间);2-11(短时间)

保存

4-8 oC20%乙醇)


3. 使用方法

Protein A QZT 4FF广泛用于各种抗体的分离纯化。层析操作通常包括装柱、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。

平衡:用5-10CV的平衡缓冲液(20 mM PB+0.15 M NaCl,pH 7.0,添加适当浓度的NaCl抑制非特异性吸附)平衡层析柱,至流出液电导和pH不变(与平衡液一致)。

  进料:样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制;低浓度样品溶液可用平衡液透析;高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱,样品应经离心或微滤(0.45 μm)处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。

  

淋洗:上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。

洗脱:用洗脱缓冲液(20 mM柠檬酸,pH 3.0;或0.1 M甘氨酸,pH 3.0;或20 mM乙酸钠,pH 3.0;具体洗脱条件与抗体的结合强度和稳定性密切相关,效果不好时应进行洗脱缓冲液(种类和pH或添加剂)的优化)洗脱,收集流出液。洗脱后,应立刻用碱性缓冲液(如1 M Tris/HCl, pH 9.0)将收集到的抗体溶液中和到抗体稳定的pH,避免抗体失活,维持抗体的生物活性。

  再生、原位清洗:介质使用数次(5-10次,具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关)后,需要对介质进行再生、在位清洗。

(1)用0.1 M的乙酸或0.1 M的乙酸/20%乙醇淋洗柱子3-5 CV,然后用缓冲液洗到中性即可重复使用;

(2)也可用0.05 M NaOH+1 M NaCl或6 M盐酸胍淋洗柱子3-5 CV,并用3-10 CV的纯水冲洗,然后用缓冲液洗到中性即可重复使用。

  其它注意事项:在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。

4. 具体应用 

    1 载量分析:利用人免疫球蛋白(血浆来源,纯度95%,3 mg/ml)进行载量分析(柱体积2 ml;Buffer A:20 mM PB+0.15 M NaCl,pH 7.0,Buffer B:0.1 M甘氨酸,pH 3.0;流速:0.5 ml/min;上样量:40 ml),层析谱图如图1(A:进口介质;B:本中心介质)所示,结果表明两种介质的层析谱图(穿透行为、洗脱峰)基本一致,无明显差异。洗脱峰的蛋白浓度分析结果表明,二者的载量相当,均在40-45 mg h-IgG/ml介质之间。

    2 纯化效果分析:利用小鼠腹水(Buffer A稀释4倍)上样进行亲和层析,考察介质的分离纯化效果(柱体积2 ml;Buffer A:20 mM PB+0.15 M NaCl,pH 7.0,Buffer B:20 mM柠檬酸,pH 3.0;流速:0.5 ml/min;上样量:4 ml),层析谱图如图2所示,纯度分析结果表明,经过一步亲和层析,即可得到纯度95%以上的IgG。

5 特色服务

(1)提供介质筛选及工艺开发的咨询。

(2)接受客户委托开发各种分离介质和分离工艺。

(3)按客户要求提供各种规格的预装柱。

(4)为客户提供专业的售前和售后服务。


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